PCR技术全攻略：从原理到实验技巧一文掌握！

2025-06-17 15:19:58

�� 为什么PCR是分子生物学的基石？

PCR（聚合酶链式反应）被称为"无细胞分子克隆"，能在2-3小时内将DNA片段扩增百万倍！无论是基因克隆、疾病诊断，还是犯罪侦查（是的，法医也靠它！），只要涉及DNA/RNA，就离不开PCR技术。

�� PCR三大核心步骤

1️⃣ 变性（93℃）

- 关键作用：高温使双链DNA解旋为单链

- 实验技巧：时间过长会损伤酶活性，通常30秒足够

2️⃣ 退火（55℃）

- 关键作用：引物精准匹配目标序列

- 避坑指南：温度过高→引物结合失败；温度过低→非特异性结合

3️⃣ 延伸（72℃）

- 关键作用：Taq酶以dNTP为原料合成新链

- 专业建议：延伸时间=1分钟/kb（如扩增1kb片段需1分钟）

�� 为什么你的PCR总失败？

▶ 阴性结果：检查模板质量/引物特异性（用BLAST验证）

▶ 非特异性条带：优化退火温度（梯度PCR试试！）

▶ 产量低：增加循环数（但别超过35轮，否则误差累积）

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